ACQUITY BEH色譜柱清洗、再生和存放
a. 清洗與再生
如果發(fā)生峰形改變、譜峰分叉、出現(xiàn)肩峰、保留時(shí)間改變、分離度變化或柱壓升高，說明色譜柱可能已被污染。通常情況下，用純有機(jī)溶劑進(jìn)行沖洗（小心避免緩沖鹽出現(xiàn)析出）就足以去除污染物。如果沖洗不能解決問題，可采用以下清洗和再生步驟。
根據(jù)樣品和/或您認(rèn)為污染色譜柱的物質(zhì)的性質(zhì)，選擇與之匹配的常規(guī)清洗方法（見表3）。
表3.ACQUITY BEH色譜柱的推薦pH和溫度限值
| 色譜柱 | 粒徑 | 孔徑 | 表面積 | pH限值 | 溫度限值 | 配基密度 | 碳載量% | |
| 低pH | 高pH | |||||||
| BEH C18 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-12 | 80℃ | 60℃ | 3.1μmol/m2 | 17.7 |
| BEH C8 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-12 | 60℃ | 60℃ | 3.1μmol/m2 | 12.8 |
| BEH苯基柱 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-12 | 80℃ | 60℃ | 3.0μmol/m2 | 14.5 |
| BEH Shield RP18 | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 2-11 | 50℃ | 45℃ | 3.2μmol/m2 | 16.6 |
| BEH HILIC | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 1-9 | 60℃ | 45℃ | — | — |
| BEH Amide | 1.7μm | 130Å | 185m2/g | 2-11 | 90℃ | 90℃ | 7.5μmol/m2 | 12 |
請(qǐng)使用20倍柱體積的溶劑沖洗色譜柱。升高柱溫可提高清洗效率。如果清洗和再生之后色譜柱性能仍然很差，請(qǐng)致電我們獲得更多支持。
用50:50乙腈/水沖洗BEH HILIC色譜柱，去除極性污染物。如果此沖洗操作不能解決問題，可用5:95乙腈:水沖洗色譜柱。
要清洗BEH Amide色譜柱中的極性污染物，請(qǐng)運(yùn)行10 min內(nèi)水從0增加到100%的梯度。請(qǐng)注意，隨著水的比例上升，柱壓也將迅速增大。在含水量大于60%的條件下運(yùn)行時(shí)，請(qǐng)降低流速。必要時(shí)請(qǐng)重復(fù)該操作。
表4.反相色譜柱清洗順序
| 極性樣品 | 非極性樣品* | 蛋白質(zhì)樣品 |
| 1.水 | 1.異丙醇(或適當(dāng)比例的異丙醇/水混合溶液** ) | 選項(xiàng)1：重復(fù)進(jìn)幾針二甲基亞砜(DM SO) |
| 2.甲醇 | 2.四氫呋喃(THF) | 選項(xiàng)2：使用10%~90% B的梯度，其中：A = 0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液，B = 0.1%三氟乙酸(TFA)乙腈(CH3CN)溶液 |
| 3.四氫呋喃(THF) | 3.二氯甲烷 | |
| 4.甲醇 | 4.正己烷 | |
| 5.水 | 5.異丙醇(然后使用適當(dāng)比例的異丙醇/水混合溶液** ) | 選項(xiàng)3：使用7 M鹽酸胍或7 M尿素沖洗色譜柱 |
| 6.流動(dòng)相 | 6.流動(dòng)相 |
* 在使用THF或正己烷之前，確保系統(tǒng)與這些溶劑兼容。只有在利用純反相有機(jī)溶劑（如乙腈）無(wú)法清洗色譜柱時(shí)，方可考慮使用諸如THF或正己烷之類的溶劑。降低流速，使用較低的操作溫度并盡量減少系統(tǒng)與THF和/或正己烷的接觸。
** 使用低有機(jī)溶劑含量的溶液，以避免出現(xiàn)緩沖鹽析出。
b. 存放
如果反相色譜柱需要在室溫下存放超過四天，應(yīng)將其保存于100%乙腈中。對(duì)于高溫應(yīng)用，請(qǐng)?jiān)谑褂煤罅⒓词褂?/span>100%乙腈保存色譜柱，以便盡可能延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。切勿使用
緩沖鹽保存色譜柱。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則先用10倍柱體積（常規(guī)色譜柱體積請(qǐng)參見表1）的HPLC級(jí)水沖洗反相ACQUITY BEH色譜柱，再用100%乙腈替換柱內(nèi)的水，然后
儲(chǔ)存。如果不執(zhí)行這個(gè)中間步驟，在引入100%乙腈時(shí)，色譜柱內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)緩沖鹽析出。BEH Amide色譜柱在保存100%乙腈前先進(jìn)行梯度沖洗至100%乙腈以將所有水相溶劑從柱中沖洗干凈。將色譜柱完quan密封，防止柱床因溶劑蒸發(fā)而變干。
如果BEH HILIC色譜柱需要存放超過四天，應(yīng)將其保存于95:5乙腈:水中。切勿使用緩沖液保存色譜柱。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則用10倍柱體積的95:5乙腈:水沖洗色譜柱（常規(guī)
色譜柱體積請(qǐng)參見表1）。
注：如果色譜柱運(yùn)行了含甲酸鹽（如甲酸銨、甲酸等）的流動(dòng)相，并且之后使用100%乙腈進(jìn)行沖洗，那么在重新安裝色譜柱并再次運(yùn)行含甲酸鹽的流動(dòng)相時(shí)，柱平衡花費(fèi)的時(shí)間可能略長(zhǎng)。
